體液蛋白組學(xué)研究現(xiàn)狀
蛋白質(zhì)是生物體功能的主要承擔(dān)者，以血漿為代表的體液蛋白質(zhì)組學(xué)為手段探索生物標(biāo)志物的研究層出不窮。低豐度蛋白是潛在標(biāo)志物的重要來源，但由于血漿等體液的復(fù)雜性及檢出手段的限制，低豐度蛋白檢出有限，新的臨床標(biāo)志物發(fā)現(xiàn)越來越少[1]，F(xiàn)DA審批的蛋白標(biāo)志物也逐年下降。因此，提高低豐度蛋白的檢出水平，對于體液蛋白組學(xué)研究至關(guān)重要。
血漿蛋白組學(xué)相關(guān)研究陸續(xù)在CNS主刊登頂
不同技術(shù)有其各自的優(yōu)缺點(diǎn)[2]，哪種技術(shù)才是未來體液蛋白組學(xué)的首選呢？質(zhì)譜法雖適合于血漿等體液生物標(biāo)志物的發(fā)現(xiàn)及機(jī)制研究，但由于通量及蛋白檢出數(shù)目等不足使其應(yīng)用受限。
以血漿為代表的體液蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)的特點(diǎn)
體液蛋白組學(xué)研究革命性技術(shù)
為了突破基于質(zhì)譜法進(jìn)行體液蛋白組學(xué)研究的技術(shù)限制，譜天生物聯(lián)合天津大學(xué)，經(jīng) 6 載潛心研發(fā)，數(shù)十種納米材料測試，2 萬余例樣本驗(yàn)證，成功研發(fā)具有自主知識產(chǎn)權(quán)的核心產(chǎn)品——下一代納米低豐度蛋白富集質(zhì)譜分析技術(shù)的液體活檢新標(biāo)志物發(fā)現(xiàn)平臺n-LAPE/MSTM，可在 5h 處理樣本 96 個(gè)，結(jié)合最新質(zhì)譜，單樣本30min有效梯度內(nèi)，蛋白檢出高達(dá) 8000+，結(jié)果穩(wěn)定，助力體液蛋白組學(xué)臨床應(yīng)用。
譜天生物--n-LAPE/MSTM平臺
獨(dú)家專利納米材料，低本高效
n-LAPE/MSTM血漿等體液蛋白質(zhì)組檢測試劑盒利用納米磁珠對不同豐度蛋白親和力的差異，偏好性吸附低豐度蛋白，提高質(zhì)譜對低豐度蛋白的檢出能力從而提升蛋白的檢出數(shù)目。
n-LAPE/MSTM平臺技術(shù)原理
蛋白檢出數(shù)目大幅提升
相對于去除高豐度蛋白的常規(guī)方法，n-LAPE/MSTM檢出蛋白數(shù)目提高 2-3 倍；30min 有效梯度質(zhì)譜蛋白檢出數(shù)目高達(dá)8000+，覆蓋 80%以上的體液蛋白，極大提升新的高性能標(biāo)志物的發(fā)現(xiàn)概率。
不同前處理方法質(zhì)譜檢測血漿蛋白檢出效果對比
深度測量
經(jīng)過富集，有效檢測蛋白含量分布跨10個(gè)以上數(shù)量級，低豐度蛋白占比由 2.54% 提升到 54.41%，＜1ng/mL 的低豐度蛋白數(shù)目由 40+ 提升到 1100+，檢出數(shù)目顯著提升，蛋白檢出更加完整[3]。
檢出數(shù)據(jù)穩(wěn)定，重現(xiàn)性高
富集試劑盒性能穩(wěn)定，經(jīng)質(zhì)譜檢測技術(shù)重復(fù)蛋白表達(dá)CV值中位數(shù)＜10%，與質(zhì)譜儀CV值相當(dāng)，表明前處理流程穩(wěn)定，未顯著增加質(zhì)譜檢測結(jié)果的離散度。穩(wěn)定檢出能夠?yàn)檠獫{蛋白組學(xué)大隊(duì)列研究、發(fā)現(xiàn)優(yōu)質(zhì)標(biāo)志物打下堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。
樣本前處理自動化
自動化可以切實(shí)解決大隊(duì)列樣本對通量的需求，減少人為誤差。譜天整合資源開發(fā)配套的自動化前處理平臺 PT-ASP480 ProTM，可實(shí)現(xiàn) 5h 完成 96 個(gè)樣本前處理，簡化試驗(yàn)操作，減少人為因素，降低批次效應(yīng)。
PT-ASP480 proTM自動化前處理平臺
樣本微量且多樣化
采用該方法進(jìn)行血漿蛋白組學(xué)研究僅需 10uL 血漿，節(jié)約珍貴樣本。同時(shí)對磁珠進(jìn)行優(yōu)化，開發(fā)出適應(yīng)不同樣本類型的試劑盒，擴(kuò)大體液種類，增加體液標(biāo)志物發(fā)現(xiàn)的可能性。
基于HFX質(zhì)譜平臺半小時(shí)有效梯度內(nèi)蛋白檢出數(shù)目
送樣建議
樣本質(zhì)量對于檢測結(jié)果至關(guān)重要，除溶血、反復(fù)凍融等常見影響蛋白檢出的因素外，常溫放置時(shí)間對檢出結(jié)果也影響巨大。因此，以血漿樣本為例，依據(jù)血漿收樣國標(biāo)[4]，收樣標(biāo)準(zhǔn)如下：
1. 用譜天提供的/EDTA采血管采集新鮮靜脈血
2. 2h 內(nèi)， 1300 g 離心 10 min，收集中上層血漿
3. 將血漿凍存于-80 ℃（短時(shí)間可暫存 -20 ℃），干冰寄送
樣本收集方法對檢出結(jié)果的影響
譜天生物提供基于n-LAPE/MSTM的高質(zhì)量體液蛋白組學(xué)服務(wù)，實(shí)現(xiàn)以血漿為代表的體液蛋白質(zhì)檢出數(shù)目革命性突破，助力體液蛋白質(zhì)的臨床轉(zhuǎn)化。同時(shí)，n-LAPE/MSTM體液蛋白前處理試劑盒即將全面開售，包含低豐度蛋白富集，蛋白、多肽提取的整套試劑，將蛋白前處理手工操作過程縮短至 3h，敬請期待！
參考文獻(xiàn)：
[1] Geyer P E , Holdt L M , Teupser D ,et al.Revisiting biomarker discovery by plasma proteomics[J].Molecular Systems Biology, 2017, 13(9):942.
[2] Suhre K, McCarthy MI, Schwenk JM. Genetics meets proteomics: perspectives for large population-based studies. Nat Rev Genet. 2021 Jan;22(1):19-37
[3] Ma C, Li Y, Li J, Song L, Chen L, Zhao N, Li X, Chen N, Long L, Zhao J, Hou X, Ren L, Yuan X. Comprehensive and deep profiling of the plasma proteome with protein corona on zeolite NaY. J Pharm Anal. 2023 May;13(5):503-513.
[4] GB/T 38576-2020《人類血液樣本采集與處理》.
